荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 05:37:46

荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理
荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理

荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理
我能够想到四个重要因素影响背景是亮还是暗（我的经验来自生物学的组织/细胞免疫荧光染色实验）：

光圈.光圈开得大,顾名思义所有光信号包括背景信号都会增强.

曝光时间.光信号再强,你只选取其中很少一部分来成像,也能够控制图像中的信号强度.
样品/玻片本身的自发荧光.
样品的非特异性染色.

总体是一个所有检测手段中共通的问题,即信噪比,信号与噪声比率.
1,2对信噪比影响不大,在背景过强时很难通过调整1,2来解决问题.如果背景不存在过强问题,则通过1确保有用信号足够强,通过2减低曝光时间至背景充分黑暗即可.

3,4才是控制信噪比的关键因素.自发荧光无法完全避免,只能通过选取自发荧光较低的材料来控制,另外固定及染色过程中的一些试剂有可能影响样本的自发荧光.非特异性染色是更为常见的造成背景问题的原因,通过优化封闭条件,抗体/试剂用量,染色时长与温度等条件来调整.

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